\documentclass[10pt,a4paper]{article} % Packages \usepackage{fancyhdr} % For header and footer \usepackage{multicol} % Allows multicols in tables \usepackage{tabularx} % Intelligent column widths \usepackage{tabulary} % Used in header and footer \usepackage{hhline} % Border under tables \usepackage{graphicx} % For images \usepackage{xcolor} % For hex colours %\usepackage[utf8x]{inputenc} % For unicode character support \usepackage[T1]{fontenc} % Without this we get weird character replacements \usepackage{colortbl} % For coloured tables \usepackage{setspace} % For line height \usepackage{lastpage} % Needed for total page number \usepackage{seqsplit} % Splits long words. %\usepackage{opensans} % Can't make this work so far. Shame. Would be lovely. \usepackage[normalem]{ulem} % For underlining links % Most of the following are not required for the majority % of cheat sheets but are needed for some symbol support. \usepackage{amsmath} % Symbols \usepackage{MnSymbol} % Symbols \usepackage{wasysym} % Symbols %\usepackage[english,german,french,spanish,italian]{babel} % Languages % Document Info \author{{[}deleted{]}} \pdfinfo{ /Title (terapia-genica.pdf) /Creator (Cheatography) /Author ({[}deleted{]}) /Subject (Terapia Genica Cheat Sheet) } % Lengths and widths \addtolength{\textwidth}{6cm} \addtolength{\textheight}{-1cm} \addtolength{\hoffset}{-3cm} \addtolength{\voffset}{-2cm} \setlength{\tabcolsep}{0.2cm} % Space between columns \setlength{\headsep}{-12pt} % Reduce space between header and content \setlength{\headheight}{85pt} % If less, LaTeX automatically increases it \renewcommand{\footrulewidth}{0pt} % Remove footer line \renewcommand{\headrulewidth}{0pt} % Remove header line \renewcommand{\seqinsert}{\ifmmode\allowbreak\else\-\fi} % Hyphens in seqsplit % This two commands together give roughly % the right line height in the tables \renewcommand{\arraystretch}{1.3} \onehalfspacing % Commands \newcommand{\SetRowColor}[1]{\noalign{\gdef\RowColorName{#1}}\rowcolor{\RowColorName}} % Shortcut for row colour \newcommand{\mymulticolumn}[3]{\multicolumn{#1}{>{\columncolor{\RowColorName}}#2}{#3}} % For coloured multi-cols \newcolumntype{x}[1]{>{\raggedright}p{#1}} % New column types for ragged-right paragraph columns \newcommand{\tn}{\tabularnewline} % Required as custom column type in use % Font and Colours \definecolor{HeadBackground}{HTML}{333333} \definecolor{FootBackground}{HTML}{666666} \definecolor{TextColor}{HTML}{333333} \definecolor{DarkBackground}{HTML}{2EB3B3} \definecolor{LightBackground}{HTML}{F1FAFA} \renewcommand{\familydefault}{\sfdefault} \color{TextColor} % Header and Footer \pagestyle{fancy} \fancyhead{} % Set header to blank \fancyfoot{} % Set footer to blank \fancyhead[L]{ \noindent \begin{multicols}{3} \begin{tabulary}{5.8cm}{C} \SetRowColor{DarkBackground} \vspace{-7pt} {\parbox{\dimexpr\textwidth-2\fboxsep\relax}{\noindent \hspace*{-6pt}\includegraphics[width=5.8cm]{/web/www.cheatography.com/public/images/cheatography_logo.pdf}} } \end{tabulary} \columnbreak \begin{tabulary}{11cm}{L} \vspace{-2pt}\large{\bf{\textcolor{DarkBackground}{\textrm{Terapia Genica Cheat Sheet}}}} \\ \normalsize{by \textcolor{DarkBackground}{{[}deleted{]}} via \textcolor{DarkBackground}{\uline{cheatography.com/101164/cs/21155/}}} \end{tabulary} \end{multicols}} \fancyfoot[L]{ \footnotesize \noindent \begin{multicols}{3} \begin{tabulary}{5.8cm}{LL} \SetRowColor{FootBackground} \mymulticolumn{2}{p{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Cheatographer}} \\ \vspace{-2pt}{[}deleted{]} \\ \uline{cheatography.com/deleted-101164} \\ \end{tabulary} \vfill \columnbreak \begin{tabulary}{5.8cm}{L} \SetRowColor{FootBackground} \mymulticolumn{1}{p{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Cheat Sheet}} \\ \vspace{-2pt}Published 23rd November, 2019.\\ Updated 1st December, 2019.\\ Page {\thepage} of \pageref{LastPage}. \end{tabulary} \vfill \columnbreak \begin{tabulary}{5.8cm}{L} \SetRowColor{FootBackground} \mymulticolumn{1}{p{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Sponsor}} \\ \SetRowColor{white} \vspace{-5pt} %\includegraphics[width=48px,height=48px]{dave.jpeg} Measure your website readability!\\ www.readability-score.com \end{tabulary} \end{multicols}} \begin{document} \raggedright \raggedcolumns % Set font size to small. Switch to any value % from this page to resize cheat sheet text: % www.emerson.emory.edu/services/latex/latex_169.html \footnotesize % Small font. \begin{multicols*}{3} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Vettori}} \tn % Row 0 \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{Murini e Aviari}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}Si possono eliminare molti o tutti i geni. Studi con HSC su topi e sorting magnetico. Usati per le {\bf{SCID}}, mettendo in HSC una copia del gene sano, e basta solo una copia in quanto è una malattia {\bf{X-linked}}. (Gene ada o Gene della catena gamma).} \tn % Row Count 7 (+ 7) % Row 1 \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{Retrovirali}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}Hanno: 2 LTR (formate in retrotrascizione); 3 geni (Gag, che codifica per il tRNA e PBS, Pol, che contiene trascrittasi inversa proteasi e integrasi, Env proteine dell'envelope). {\bf{Svantaggio}} s'integrano solo in mitosi. Esistono anche con LTR non funzionante: sIN. Esempi: Virus di Molony e Virus di Rous. {\bf{Integrazione casuale}}, ma spesso in siti di trascrizione MECOM.} \tn % Row Count 16 (+ 9) % Row 2 \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{Lentivirali}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}Hanno: LTR; Gag; Pol; Env; geni accessori (Rev e RREV); Segnale d'incapsidamento; tRNA; Trascrittasi Inversa; Proteina G del VSV; Promotore e gene terapeutico. {\bf{1° generazione}} a bassa sicurezza. {\bf{2° Generazione}} delezione geni non importanti. {\bf{3° generazione}} LTR non funzionante, uso di promotore, 3 plasmidi di packaging. Integrazione abbastanza casuale: {\bf{Hotspots}}.} \tn % Row Count 26 (+ 10) % Row 3 \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{AAV}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}ssDNA, 5Kbp. Polarità + o - incapsidamento al 50\% con una polarità o l'altra. Hanno: 2 ITR; Rep e Cap. Non sono patogeni; {\bf{Alta molteplicità d'infezione}} (Cocktail di geni); Integrazione sul {\bf{cromosoma 19}}; uso anche su {\bf{cellule perenni}}; {\bf{persistenti}}, usati per fare {\bf{topi transgenici}}; {\bf{tropismo selettivo}} per cuore; muscolo e pancreas. Associati a metodi per la rottura del DNA (per evitare il legame con l'MNR complex)} \tn % Row Count 37 (+ 11) \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica per l'Occhio}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{È un organo molto adatto alle applicazioni di terapia genica. Perché: \newline % Row Count 2 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} è {\emph{facilmente accessibile}} \newline % Row Count 3 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} presenta una struttura anatomica molto compartimentalizzata che {\emph{consente la somministrazione locale di vettori}}, ed è un sito {\bf{immuno-privilegiato}}. Questo perché, anche nel caso in cui il soggetto presentasse Ab anti-AAV, nell'occhio i vettori non sarebbero non sarebbero eliminati. \newline % Row Count 10 (+ 7) \{\{fa-chevron-right\}\} esistono molti modelli animali facilmente reperibili (Cane mutato RPE65). \newline % Row Count 12 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} Il vettore AAV, somministrato in via {\bf{intra-vitreale}} (nel bulbo ottico) è capace di trasdurre le cellule ganglionari della retina che poi arrivano al cervello. \newline % Row Count 16 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} Invece è possibile inserire nello spazio {\bf{sotto-retinico}} la siringa per la somministrazione dei vettori AAV trasducendo i fotorecettori e cellule intermedie (epitelio pigmentato). \newline % Row Count 21 (+ 5) ~ \newline % Row Count 22 (+ 1) La terapia genica ha riscontro per: \newline % Row Count 23 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Amaurosi congenita di Leber}}: è una {\emph{retinite pigmentosa}} in cui coni e bastoncelli degenerano. Quando la luce colpisce la rodopsina, la reazione che stimola il nervo ottico è {\emph{irreversibile}} =\textgreater{} dev'esserci un {\emph{turnover}} dei dischi che avviene per fagocitosi da parte delle cellule dell'epitelio pigmentato retinico. Poi saranno sostituiti da nuovi dischi che arrivano in superficie. \newline % Row Count 32 (+ 9) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica per l'Occhio (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Meccanismo di fagocitosi inattivo}}: =\textgreater{} {\emph{fotorecettore degenera}}. La cosa inizia a livello dei bastoncelli ( che sono più sensibili a causa dell'alto turnover dei dischi) restringendo il campo visivo fino alla cecità. Dal punto di vista istologico vi è un {\emph{assottigliato dello strato dei recettori}}, con perdita dell'intero recettore. {\bf{Terapia nell'uomo}}: AAV RPE65 iniezione sotto-retinica. Si vedono miglioramenti. \newline % Row Count 9 (+ 9) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Retinoschisi}}: Difetto genetico per cui le 2 metà della retina non si fondono perfettamente e si hanno bolle a livello sotto-retinico. Approccio classico di terapia genica: rilascio di una proteina mutata (RS1). \newline % Row Count 14 (+ 5) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Coroidoidremia}}: Difetti nel gene REP1 (Rag Escort Protein 1). Si ha assottigliamento della retina =\textgreater{} degenerazione della retina, trattata con un vettore AAV-REP1. \newline % Row Count 18 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Cecità}}: per ristabilire la visione si stimolano direttamente le cellule ganglionari della retina. Qui si usa l'{\bf{optogenetica}} che converte le cellule ganglionari della retina in fotorecettori trasferendo i geni delle proteine sensibili alla luce. \newline % Row Count 24 (+ 6) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Age Macular Degeneration, AMD}}: La zona della macula e della fovea può degenerare per patologie diverse: \newline % Row Count 27 (+ 3) 1) {\bf{Forma secca}}: Atrofia dei recettori. Forma meno grave e più frequente. \newline % Row Count 29 (+ 2) 2) {\bf{Forma umida}}:Dovuta a neo-vascolarizzazione retinica, data da iperproduzione di VEGF, in cui i vasi sanguigni invadono la macula =\textgreater{} non funzionano bene in quanto iper-permeabili e causano edema, emorragie e cecità. Forma più rara e più grave, anche in progressione. Terapie: \newline % Row Count 35 (+ 6) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica per l'Occhio (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Aptameri}}: Macugen lega il VEGF a 165 amminoacidi e lo blocca, con iniezione intra-vitreale. \newline % Row Count 3 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{MAb anti-VEGF}}:Lucentis, legante tutte le forme di VEGF, con iniezione intra-vitreale. \newline % Row Count 6 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Avastin}}: sviluppato per tumori al colon, costa meno del Lucentis e ha lo stesso effetto. \newline % Row Count 9 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Cellule staminali embrionali}}: molto dibattute perchè portano a teratomi.% Row Count 11 (+ 2) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Anatomia occhio}}: dal {\bf{bulbo}}, verso la parte più interna dell'occhio, troviamo prima il {\bf{nervo ottico}}, poi al disotto i fotorecettori, e al disopra un {\bf{epitelio pigmentato}}. \newline {\bf{Fotorecettori}}, lo strato esterno è formato dai dischi in cui sono inserite le proteine utili per la visione: \newline \{\{fa-chevron-right\}\} I bastoncelli contengono solo la rodopsina. \newline \{\{fa-chevron-right\}\} I coni possiedono 3 pigmenti responsabili della visione dei colori (eccitati dalla luce a diverse λ).} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del Cuore}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{Le CVDs comprendono una serie di patologie comprendo: \newline % Row Count 2 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{ICTUS}}, \newline % Row Count 3 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{ISCHEMIE DEGLI ARTI INFERIORI}}: claudicatio, insufficienza trofica da irrorazione =\textgreater{} comparsa di ferite che non guariscono, gangrena franca. \newline % Row Count 7 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{MALATTIE ISCHEMICHE}}, come la {\bf{cardiomiopatia ischemica}}: occlusione di un vaso. Le placche che si formano non necessariamente occludono il vaso ma limitano il flusso di sangue in modo costante. Per riaprire il vaso si usa un palloncino che si rigonfia. Ma c'è complicanza da {\bf{RESTENOSI}}: processo a livello della tunica media in cui si ha un aumento della proliferazione che porta alla richiusura del vaso. Si risolve con {\emph{stent medicati}} insieme a {\emph{rapamicina}} che bloccano la proliferazione, associati ad anticoagulanti. \newline % Row Count 19 (+ 12) {\bf{ANGIOGENESI}} formazione di vasi sanguigni in tessuti adulti, avviene in venule post capillari: {\bf{Sprouting}}. {\emph{Come avviene?}} \newline % Row Count 22 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} Il {\bf{VEGF}} (o {\bf{FGF}}) induce la degradazione della membrana basale del vaso preesistente e le cellule migrano formando un tubo primitivo che va verso la sede di produzione del VEGF (concentrazione più alta). Questo vaso primitivo è formato da 2 tipi di cellule endoteliali: \newline % Row Count 28 (+ 6) 1. {\bf{tip cells}} sul fronte d'invasione del vaso, non proliferano, sentono il gradiente chemiotattico e tramite noch signaling inducono il differenziamento delle cellule vicine in stock cells. \newline % Row Count 32 (+ 4) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del Cuore (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{2. {\bf{stock cells}} altamente proliferative. \newline % Row Count 1 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} Quindi il neo-vaso subirà rimodellamenti: smette di proliferare quando incontra altre cellule che lo rendono indipendente da VEGF e regolano la direzionalità di crescita. \newline % Row Count 5 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} Poi matura grazie a: {\bf{angiopoietine, PDGF-B, TGF-β}}. \newline % Row Count 7 (+ 2) Delivery di VEGF a livello del cuore per via: \newline % Row Count 8 (+ 1) \{\{fa-caret-right\}\} intravenosa \newline % Row Count 9 (+ 1) \{\{fa-caret-right\}\} intracoronarica \newline % Row Count 10 (+ 1) \{\{fa-caret-right\}\} Direttamente nel cuore dall'endocardio o dall'esterno \newline % Row Count 12 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} Intrapericardico per trattare cardiopatia ischemica. \newline % Row Count 14 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} Perivascolare (rilascio di VEGF attorno ai vasi). \newline % Row Count 16 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} Iniezione nel al seno coronarico. \newline % Row Count 18 (+ 2) Negli arti inferiori: \newline % Row Count 19 (+ 1) \{\{fa-caret-right\}\} Iniezioni multiple intramuscolari degli arti inferiori \newline % Row Count 21 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} Intrarterioso \newline % Row Count 22 (+ 1) {\bf{Terapia Genica Obbiettivi}}: \newline % Row Count 23 (+ 1) 1. {\emph{Indurre neo-angiogenesi}} delle aree del miocardio normalmente non ri-vascolarizzabili con le metodiche classiche. \newline % Row Count 26 (+ 3) 2. {\emph{Cardio protection}}, dei cardiomiociti vivi. \newline % Row Count 27 (+ 1) 3. {\emph{Rigenesi del miocardio}}. \newline % Row Count 28 (+ 1) {\bf{Terapia per la Neo Angiogenesi}} \newline % Row Count 29 (+ 1) \{\{fa-caret-right\}\} Uso di biofarmaci: smallRNA o miRNA; {\bf{proteine ricombinanti}} =\textgreater{} sicure ma non efficaci in pazienti con CHD (Chronic heart Disease) e PAOD (Ischemia periferica). {\emph{Perchè?}} \newline % Row Count 33 (+ 4) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del Cuore (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{⚠ Per formare un vaso stabile servono almeno 14/30 giorni in cui è attivamente presente VEGF =\textgreater{} emivita in vivo insufficiente. Non si hanno problemi di mutagenesi inserzionale, tipica dei vettori retrovirali. \newline % Row Count 5 (+ 5) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{VEGF come plasmide nudo o con Adenovirus}} iniziale risposta positiva =\textgreater{} Fase 2 non funziona!. In adenovirus =\textgreater{} {\bf{risposta infiammatoria elimina le cellule trasdotte}}! \newline % Row Count 9 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Vettori AAV}}: Si usa VEFG sotto controllo di promotore {\bf{tet on/off}} e {\bf{doxiciclina}} in vivo per 30 giorni: VEFG è espresso, i vasi si formano e restano anche se poi spegniamo il gene.% Row Count 14 (+ 5) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{VEGF = Vascular Endotelial Growth Factor}} famiglia di proteine. più isoforme, ognuna lega un recettore;il principale: {\bf{VEGFR-2/KDR/FIk-1}} \newline {\bf{FGF = Fibroblast Growth Factor}} \newline {\bf{BYPASS}}: Con vena del paziente si fa l'anastomizzazione a monte e a valle della zona occlusa. No in pazienti con malattie multi-vasali quindi nel tempo hanno scompenso cardiaco. \newline {\bf{Sistema NOGA}}: mappatura elettro-meccanica del cuore e rilascio di fattori terapeutici nel miocardio.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del Muscolo}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Distrofia muscolare}}: alterazione delle proteine del complesso DGC che coinvolge la {\emph{distrofina}} proteina con peso di 427kDa; {\bf{2,4 Mbp}} di cui la coding region {\bf{11kbp}}. \newline % Row Count 4 (+ 4) Due forme cliniche: {\bf{DMD e DMB}}. \newline % Row Count 5 (+ 1) {\bf{DMD}}: proteina tronca o instabile quindi non funzionante. {\emph{terapia}}: Corticosteroidi per alleviare i sintomi. \newline % Row Count 8 (+ 3) {\bf{BMD}}: delezione dei siti centrali della distrofina senza compromettere i domini N-t (che lega l'actina) e C-t ( Che lega il complesso DGC). Qui la distrofina è più piccola ma funzionante: patologia meno grave della DMD. \newline % Row Count 13 (+ 5) {\bf{Terapia Genica}}: Trasforma la DMD in DMB. però il gene della distrofina è molto grande e ci sono problemi a inserirlo interamente. \newline % Row Count 16 (+ 3) {\bf{Vettore di scelta}}: AAV, anche se piccolo =\textgreater{} {\emph{produzione di una distrofina più piccola}}: Mini- distrofine (6kbp) e Micro-distrofine (4kbp) con entrambe N-t e C-t.% Row Count 20 (+ 4) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{Altre terapie: \newline {\bf{exon skipping}}: oligontd antisenso, ristabilisce il frame di lettura, esclude uno o più esoni dalla traduzione. Risultato: distrofina più corta, ma funzionale. \newline {\bf{Genome-editing}}:CRISPR/Cas9. \newline {\bf{Muscle building strategy 1}} =\textgreater{} {\bf{NON FUNZIONA!}} {\emph{L'utrofina}}= proteina omologa della distrofina (funzionale e strutturale) . Si fa con AAV. \newline {\bf{Muscle building strategy 2}}: sull'asse fallistatina-miostatina. La 1° inibisce la 2°.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Differenza tra...}} \tn % Row 0 \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{Animali Knock-out}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}Animale in cui è soppressa,{\bf{l'espressione di un determinato gene}}.} \tn % Row Count 3 (+ 3) % Row 1 \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{Animali Knock-in}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}Animale in cui {\bf{si sostituisce una sequenza endogena con un'altra sequenza}} e ci permette per esempio di studiare l'effetto della mutazione.} \tn % Row Count 8 (+ 5) % Row 2 \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{ac\}\} {\bf{Animali Transgenici}}} \tn \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\hspace*{6 px}\rule{2px}{6px}\hspace*{6 px}È inserito un gene in un animale e si {\bf{aumenta la sua espressione.}} I geni inseriti possono essere anche di un altro animale, e {\emph{s'integrano casualmente}}.} \tn % Row Count 13 (+ 5) \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del SNC}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Vettore di scelta}}: AAV. \newline % Row Count 1 (+ 1) {\bf{Obbiettivi}}: controllare i sintomi; promuovere la rigenerazione e sopravvivenza dei neuroni; o rimpiazzare la funzione del gene mancante. \newline % Row Count 4 (+ 3) {\bf{Fattori Neurotrofici}}: \newline % Row Count 5 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Nurotrofine}}: {\emph{NGF}} (Nerve Growth Factor), {\emph{BDGF}} (Brain Derived Growth Factor), {\emph{NeuroTrofine 3 e 4}}. Legano recettori Tyr-kinasici o {\bf{TRK}} sulla membrana dei neuroni. Questi si associano in eterodimerizzazione con un altro recettore della stessa famiglia: {\bf{p75}}. {\emph{Ognuno dei Trk può legare uno dei membri delle neurotrofine, mentre tutti sono in grado di legare il recettore p75.}} \newline % Row Count 14 (+ 9) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Famiglia di GDNF}} (Glial Drived Neurotrophin Factor): {\emph{GDNF, neuroturina (NTN), artemina (ART), persefina (PSP)}}. \newline % Row Count 17 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Famiglia del CNTF/LIF}} (Celialy Derived Neurotophic Factors e Leukemia Inibitory factor). \newline % Row Count 20 (+ 3) ~ \newline % Row Count 21 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Alzheimer}}: Atrofia cerebrale diffusa a causa della perdita di neuroni colinergici prima nell'ippocampo e poi della corteccia cerebrale. {\bf{Terapie}}: \newline % Row Count 25 (+ 4) 1) {\emph{somministrazione di NGF}} per il modello di trattamento in animali =\textgreater{} Effetti benefici: \newline % Row Count 27 (+ 2) - Protezione dei neuroni colinergici dopo una axotomia; \newline % Row Count 29 (+ 2) - Reversione dell'atrofia legata all'invecchiamento; \newline % Row Count 31 (+ 2) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del SNC (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{- Migliora memoria e apprendimento. \newline % Row Count 1 (+ 1) 2) {\emph{Trial clinici con NGF come proteina ricombinate (rNGF)}}: somministrata per via centrale. \newline % Row Count 3 (+ 2) 3) {\bf{Delivery Genico}}: Vettori virali (retrovirus di Moloney) ex vivo =\textgreater{} prelievo fibroblasti autologhi, trasdotti con retrovirus che esprime NGF, e reimpianto nel cervello del paziente. Risultato: aumento del metabolismo cellulare del glucosio e formazione di neuroni colinergici =\textgreater{} Minore declino cognitivo. \newline % Row Count 10 (+ 7) 4) {\emph{Studio in fase 1 con il CERE-110}}: Risultati =\textgreater{} {\bf{non funziona!}} C'è un {\bf{bias sulle metodiche di sperimentazione}}.% Row Count 13 (+ 3) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\emph{NB}} i neuroni non perennemente stimolati muoiono tramite apoptosi. Si può contrastare con l'uso di fattori di crescita che promuovono la sopravvivenza: {\bf{Fattori Neurotrofici}}.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica: Morbo di Parkinson}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{Dovuto alla predita di neuroni dopaminergici della sostanza Nigra. \newline % Row Count 2 (+ 2) 4 possibilità di terapia genica: \newline % Row Count 3 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{AAV}}: trasdurre geni che aumentino la dopammina: attività dopaminergica aumentata, sui sintomi non ci sono miglioramenti; \newline % Row Count 6 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} Interferire con l'aggregazione proteica; \newline % Row Count 8 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} Produzione e {\bf{delivery di fattori neurotrofici}}; \newline % Row Count 10 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{AAV-GAD}}: introducono geni che producono GABA per regolare l'attività dei nuclei sotto-talamici. L'enzima GAD produce i GABA. \newline % Row Count 14 (+ 4) {\emph{Fase1}}: iniezione unilaterale di AAV-GAD. {\bf{Risultati}} =\textgreater{} riduzione di assunzione di Levodopa e miglioramento bilaterale! \newline % Row Count 17 (+ 3) {\emph{Fase 2 }}: Iniezione bilaterale, valutazione sicurezza e metabolismo dei neuroni.% Row Count 19 (+ 2) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Terapie attuali}}: \newline 1) Somministrazione della {\emph{Levodopa}} (farmaco analogo del precursore della dopamina, che agisce sullo striato) associata alla {\emph{Carbidopa}} (inibitore delle carbossilasi periferiche, che altrimenti inattiverebbero il farmaco). =\textgreater{} perde efficacia nel tempo = {\bf{Più effetti collaterali!}} \newline 2) {\emph{Deep Brain Stimulation}} Si danno scariche elettriche per tenere sotto controllo l'ipereccitabilità dei neuroni sotto-talamci. =\textgreater{} Trattamento autogestibile in pazienti giovani.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del cuore 2}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{TET-ON e TET-OFF: }} \newline % Row Count 1 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{TET-off}}: ci sono due vettori: \newline % Row Count 3 (+ 2) {\bf{1. }}Ha {\bf{tTA (transattivatore)}} fuso a {\bf{VP16}} (espressione costitutiva); \newline % Row Count 5 (+ 2) {\bf{2. }}Ha il {\bf{gene terapeutico}} legato ad un promotore artificiale che è formato in parte è {\bf{CMV}} e per il resto lega l'operatore tTETO. \newline % Row Count 8 (+ 3) Nel sistema quando {\bf{non c'è tetraciclina}} tTA libero si lega a tetO e lo esprime; in {\bf{presenza di tetraciclina}} lega tTA impedendogli di legare l'operatore =\textgreater{} {\bf{l'espressione non avviene}}; \newline % Row Count 13 (+ 5) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{TET-on}}: ci sono di nuovo i due vettori con le stesse caratteristiche ma con un controllo inverso =\textgreater{} se {\bf{c'è tetraciclina si lega a tTA}} e solo così {\emph{tTA è capace di legarsi all'operatore}} e quindi il {\bf{gene si esprime}}. \newline % Row Count 19 (+ 6) {\bf{Terapie per lo scompenso cardiaco}} \newline % Row Count 20 (+ 1) {\emph{Obbiettivo}}: neo-rivascolarizzazione di un arto o cuore ischemico. \newline % Row Count 22 (+ 2) {\emph{Sperimentazione animale}}: Modello di cane instrumentato con un occlusore idraulico nelle coronarie.Nella regione irrorata da quella coronaria così come in una regione più remota sono posizionanti dei {\bf{cristalli piezoelettrici}}. Il loro movimento è monitorabile =\textgreater{} registra parametri fisiologici. Si induce un piccolo infarto al cui bordo è state iniettato AAV di controllo o esprimenti con VEGF. Si monitora la contrattilità del cuore e, in presenza di una zona infartuata, si ha l'allontanamento dei 2 cristalli in sistole =\textgreater{} shortening negativo. {\bf{In animali trattati con VEGF}} =\textgreater{} ripresa della contrattilità fino all'80\%. =\textgreater{} {\bf{Effetto diretto sui miocardiociti}}. \newline % Row Count 36 (+ 14) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del cuore 2 (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-chevron-right\}\} Studiando i recettori di VEFG, in modelli animali, si è visto che iniettando AAV con il recettore {\bf{VEGFb}} si è in grado di {\bf{ripristinare e prevenire lo scompenso cardiaco}}. \newline % Row Count 4 (+ 4) {\bf{Difetti della Serca2a}}=\textgreater{} aumento di calcio porta a contrazione meno efficace, soluzioni possibili: \newline % Row Count 7 (+ 3) \{\{fa-caret-right\}\} Inibizione del fosfolambdano =\textgreater{} inibisce l'ATPasi SERCA2a \newline % Row Count 9 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} Indurre una maggiore espressione della pompa SERCA2a: con {\bf{AAV1}} =\textgreater{} non funziona! \newline % Row Count 12 (+ 3) \{\{fa-caret-right\}\} Modulazione dell'attività β-adrenergica (più adrenalina più rilascio di calcio) \newline % Row Count 15 (+ 3) \{\{fa-caret-right\}\} Esprimere proteine che possano avere un effetto cardio-protettivo (VEGF e IGF1). \newline % Row Count 18 (+ 3) {\bf{Terapia genica per la rigenerazione del cuore}} \newline % Row Count 19 (+ 1) I miocardiociti hanno un minimo potenziale rigenerativo che potrebbe essere riattivato, dopo il suo spegnimento nella 1° settimana di vita. (Studi con C14) \newline % Row Count 23 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} I {\bf{miRNA}} sono down (o up) regolati in seguito a scompenso cardiaco, e regolano la capacità proliferativa dei miocardiociti durante lo sviluppo. Esistono marker di proliferazione cellulare: {\bf{miR199a e miR590}} evidenziati con {\bf{EDu}} e {\bf{l'α-actinina}} in topo. {\bf{Aurora B}} è un marker di citochinesi. In vettori che usano miRNa ai bordi di zone infartuate =\textgreater{} si preserva funzione e la struttura, quindi rigenerazione. \newline % Row Count 32 (+ 9) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica del cuore 2 (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Target}} dei miRNA: silenziano simultaneamente {\emph{geni per proteine di assemblaggio della struttura sarcomerica e citoscheletrica}}. \newline % Row Count 4 (+ 4) {\bf{Disassemblare il sarcomero}} =\textgreater{} segnale che elimina {\bf{l'hippo pathway}}. \newline % Row Count 6 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Esperimenti su maiale}}: Quelli che hanno ricevuto AAV che esprime il miRNA dopo l'infarto hanno un cuore relativamente normale (lievi aree ipocinetiche) ma dopo due settimane presentano {\bf{aritmia o cluster di cellule proliferanti}} causa =\textgreater{} espressione di miRNA per lungo tempo =\textgreater{} {\bf{de differenziamento delle cellule cardiache}} che hanno sviluppato delle strutture simili a tumori. \newline % Row Count 15 (+ 9) Quindi si pensa ora di somministrare i miRNA come {\bf{minis}}, cioè piccole molecole più sicure: in piccoli animali funzionano (restano per 12 giorni).% Row Count 19 (+ 4) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{Recettori: \newline {\bf{VEGF-R2}}= principale recettore angiogenico localizzato in corrispondenza dei vasi. \newline {\bf{VEGF-R1}}= localizzazione miocardiocitaria,entro la struttura del disco intercalare. \newline Fattori: (entrambi hanno effetto cardio-protettivo) \newline {\bf{VEGFa}} lega sia VEGF-R1 ché il VEGF-R2 \newline {\bf{VEGFb}} lega solo il recettore 1.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia Genica dell'Emofilia}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{Patologia {\bf{X-Liked}} dovute alla mancanza o al malfunzionamento di alcune delle proteine della coagulazione. Due forme: \newline % Row Count 3 (+ 3) {\bf{Emofilia A}}: dovuta a un difetto del gene che codifica per il Fattore VIII. \newline % Row Count 5 (+ 2) {\bf{Emofilia B}}: dovuta a un difetto del Fattore IX. \newline % Row Count 7 (+ 2) Terapia {\emph{sostitutiva}}: trasfusione di sangue. \newline % Row Count 8 (+ 1) {\bf{Terapia genica}}: Basta una correzione del 10-50\% per ristabilire il fenotipo normale. {\bf{Vettore di scelta}}: AAV: il fattore 8° è troppo grande per essere inserito, ma per il 9° va bene. Se iniettato nel muscolo il fattore 9° porta ad aumento di sintesi di fattore 9° a livello locale; ma non avviene ciò nel fegato a causa di ab-anti AAV che causavano infiammazione epatica. \newline % Row Count 16 (+ 8) ~ \newline % Row Count 17 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} In pazienti con emofilia B severa trattati con {\emph{AAV8}}, nel fegato, e usando vettori scAAV(self complementary AAV), ed un fattore {\emph{IX-codon optimized}} cioè con più proteina e più stabile rispetto alla wt, si è riscontrato nel tempo un'espressione tra il 2 ed il 11\%. Nel 2014 i 6 soggetti sono liberi dalla terapia sostitutiva. \newline % Row Count 25 (+ 8) ~ \newline % Row Count 26 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} Si sono fatti anche studi per l'emofilia A e si è sviluppato un sistema dove si elimina il dominio B del Fattore 8 che si può produrre e clonare nell'AAV 5 (che accomoda geni più grandi).% Row Count 31 (+ 5) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-chevron-right\}\} Si sono scoperti pazienti che hanno un fattore 9 mutato è {\emph{più funzionante del normale}}. Sono in corso sviluppi anche di un fattore IX-Padua, con sostituzione di 2 nt e un AA, determinando un fattore 9x più attivo di un fattore IX normale.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia genica SMA e SLA}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{1) Atrofia Muscolare Spinale (SMA)}}: Malattia genetica data dal gene {\bf{SMN}} (Survival Motor Neuron) presente in due tipi di copie: {\emph{SMN1}} (telomero) e {\emph{SMN2}} (centromero). \newline % Row Count 4 (+ 4) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{SMN1}} codifica per la proteina SMN, essenziale per la sopravvivenza e il normale funzionamento dei motoneuroni. \newline % Row Count 7 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} I pazienti affetti da SMA hanno un numero variabile di copie di un secondo gene, {\bf{SMN2}}, codifica per una forma accorciata della proteina SMN, con funzionalità ridotta al 10\%. Il n° di copie del gene SMN2 è alla base della grande variabilità della patologia. Tipologie: \newline % Row Count 13 (+ 6) - {\emph{Tipo 1}}: solo 2 copie di SMN sano: 15\% di SMN funzionante, è la forma più grave. \newline % Row Count 15 (+ 2) - {\emph{Tipo 2}}: Hanno maggiori quantità di SMN e quindi presentano varianti meno severe della condizione. \newline % Row Count 18 (+ 3) - {\emph{Tipo 3 e 4}}: In età adulta, hanno più proteina, è la forma meno grave. \newline % Row Count 20 (+ 2) Terapie con vettori virali: \newline % Row Count 21 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{AAV9}} buoni risultati, ma aumento degli enzimi epatici dato da AAV, che può essere controllato; \newline % Row Count 24 (+ 3) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Oligonucleotide anti-senso}}: {\emph{Nusinersen}} interferisce con lo splicing della proteina SMN2 =\textgreater{} aumenta la proteina funzionale con buoni risultati in tutte le forme. \newline % Row Count 28 (+ 4) {\bf{NB}}: entrambe sono terapie che alleviano i sintomi ma non guariscono. \newline % Row Count 30 (+ 2) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia genica SMA e SLA (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{~ \newline % Row Count 1 (+ 1) {\bf{2) Sclerosi laterale amiotrofica (SLA)}}: Malattia sporadica che determina degenerazione dei motoneuroni sia superiori, che inferiori. Il decorso di questa patologia può essere rallentato dal trattamento con farmaci glutammato-bloccanti (riluzolo) ma funziona poco o nulla. Il {\bf{10\% delle forme sono genetiche dominanti}} e il gene mutato è l'enzima superossido dismutasi 1 ({\bf{SOD1}}). Questo ha 3 isoforme: SOD1 citoplasmatica;2 mitocondriale;3 esterna alla cellula. In topi knock-in si osserva una gain-of-function del gene e sintomatologia SLA-like. Terapie: \newline % Row Count 13 (+ 12) \{\{fa-chevron-right\}\} In {\bf{topi VGF𝛿 𝛿}} si hanno sintomi SLA-like, ed esprimono meno VGF a livello spinale. Ottenuti con delezione in una regione sensibile all'ipossia di VEGF. =\textgreater{} {\bf{No difetti vascolari!}} La somministrazione di AAV-VEGF prolunga la vita del topo sia per un'iniezione intramuscolare ché per via \seqsplit{intra-cerebro-ventricolare}. In genere ogni neurone termina con una giunzione neuromuscolare, ma il VEGF dà origine a {\bf{multiple giunzioni neuromuscolari}}. Con il VEGF pare che queste si stabilizzano a seguito di iper-sprouting assonale.% Row Count 25 (+ 12) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{VEGF}} è nato come fattore neurotrofico ma nell'evoluzione è stato adottato per lo sviluppo dei vasi sanguigni. VEGF è il fattore pleiotropico per eccellenza. \newline \{\{fa-chevron-right\}\} Il cono di crescita del neurone sviluppa dei {\bf{filopodi}} e {\bf{lamellipodi}}: estrusioni ricche di recettori per fattori di crescita che stimolano la crescita e ne guidano la direzione di crescita. Queste sono molto simili a quelle delle {\bf{tip cells endoteliali}}.} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia genica dei Tumori}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Oncogene}}: è un gene che porta la cellula verso lo sviluppo di un fenotipo neoplastico \newline % Row Count 2 (+ 2) {\bf{Oncosoppressore}}: è un gene che codifica per prodotti che agiscono negativamente sulla progressione del ciclo cellulare, proteggendo la cellula dall'accumulo di mutazioni potenzialmente tumorali. \newline % Row Count 6 (+ 4) {\bf{Cancer gene atlas}}: ha mappato circa 200 geni coinvolti nella trasformazione neoplastica. \newline % Row Count 8 (+ 2) Si può agire su: \newline % Row Count 9 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Sulla cellula tumorale}} modificandole direttamente, compresi i meccanismi che la trasformando cellula tumorale. Tramite: \newline % Row Count 12 (+ 3) a) {\emph{inibizione della proliferazione}}, \newline % Row Count 13 (+ 1) b) {\emph{trasferendo geni suicidi in queste}}, \newline % Row Count 14 (+ 1) c) sfruttando {\emph{virus oncolitici}}. \newline % Row Count 15 (+ 1) Le prospettive non sono troppo incoraggianti. \newline % Row Count 16 (+ 1) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Sul SI}} Attivandolo contro il tumore, e contrastare la crescita delle cellule cancerose ({\bf{immuno-gene-therapy}}). Si fa con: \newline % Row Count 20 (+ 4) a) aumento della {\bf{stimolazione antigenica}} da parte del cancro, \newline % Row Count 22 (+ 2) b) aumentare la {\bf{risposta delle cellule T citotossiche}} \newline % Row Count 24 (+ 2) c) Modificare le cellule T citotossiche {\bf{effettrici attive}} contro le cellule tumorali. \newline % Row Count 26 (+ 2) Attivando il SI si può aspirare in un'{\bf{immunoterapia dei tumori}}. \newline % Row Count 28 (+ 2) \{\{fa-chevron-right\}\} {\bf{Sulle cellule staminali ematopoietiche}} trasferendo in queste i geni che riducono la tossicità della chemioterapia. Per aumentare l'indice terapeutico della chemioterapia. \newline % Row Count 32 (+ 4) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia genica dei Tumori (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-caret-right\}\} {\bf{Primi tentativi }}: attivazione di oncosoppressori o inattivazione gli oncogeni. =\textgreater{} Prima con {\bf{oligontd naive}} dove si blocca la sintesi di un gene alterato, che altrimenti attiverebbe il ciclo cellulare. \newline % Row Count 5 (+ 5) =\textgreater{} Poi si sono usati {\bf{oligontd fosfotioati}} modificati con sostituzione di un ossigeno con uno zolfo per impedirne la degradazione. \newline % Row Count 8 (+ 3) =\textgreater{} Poi con {\bf{LNA}} (morfolino =\textgreater{} knockout in zebrafish) o {\bf{PNA}} \newline % Row Count 10 (+ 2) Risultatom =\textgreater{} 0! Sevono {\bf{molti oligontd}} per bloccare gli mRNA di un gene alterato. \newline % Row Count 12 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} {\bf{Ribozimi}}: struttura a RNA, attività enzimatica, si associano a mRNA lo tagliano e lo distruggono. Due tipi: \newline % Row Count 15 (+ 3) 1. {\bf{Hammerhead }}: Si possono associare a qualsiasi sequenza per la quale siano progettati. \newline % Row Count 17 (+ 2) 2. {\bf{A forcina}}: Funzionano in modo analogo agli Hammerhead (struttura 3D poco più complessa). \newline % Row Count 19 (+ 2) =\textgreater{} Si sono sviluppati per la {\bf{Leucemia Mieloide Cronica}} ma sono stati rimpiazzati dal Gleevec che inibisce la chinasi ibrida Bcr-Abl. \newline % Row Count 22 (+ 3) \{\{fa-caret-right\}\} {\bf{iRNA}}: sistema endogeno di silenziamento degli RNA. \newline % Row Count 24 (+ 2) \{\{fa-caret-right\}\} {\bf{Pro drug therapy}}: con {\bf{profarmaci}} sfrutta il meccanismo dell'Herpes simplex. I farmaci si attivano con la timidina kinasi, presente nelle cellule infette, tramite fosforilazione. =\textgreater{} è incorporato nella catena nascente del DNA e porta la cellula alla morte. =\textgreater{} {\emph{non fa niente alle cellule sane, ma uccide selettivamente quelle infettate dal virus}}.(profarmaco: {\bf{Ganciclovir}}=\textgreater{} funziona in topo ma non in uomo =\textgreater{} {\bf{effetto by-stander}}: responsabile della replicazione tumorale in animali, le cellule infettate che muoiono rilasciano metaboliti tossici che entrano nelle cellule vicine. =\textgreater{} effetto positivo in topo, ma non è presente nell'uomo! \newline % Row Count 38 (+ 14) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia genica dei Tumori (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-caret-right\}\} {\bf{Virus Oncolitici}} Si è visto che in soggetti con tumore in un certo stadio, se contraevano patologie virali e poi guarivano, erano anche guariti dal tumore! =\textgreater{} Si può usare direttamente il virus per uccidere il tumore! Funzionano bene associati a chemioterapia. \newline % Row Count 6 (+ 6) Uso di {\bf{Adenovirus}}: esprime {\bf{E1A}} (ma non E1B). Nei tumori p53 non è attivo =\textgreater{} ciclo replicativo del virus = {\bf{morte cellule tumorali, il virus si diffonde ad altre}} ( nelle sane invece p53 è attivo e si induce apoptosi) \newline % Row Count 11 (+ 5) {\bf{ONYX015}}: iniettato in modo intratumorale e privo di E1B =\textgreater{} effetto {\bf{citopatico selettivo per le cellule p53 negative}}. \newline % Row Count 14 (+ 3) \{\{fa-caret-right\}\} {\bf{Immunoterapia dei Tumori}}: poco efficace \newline % Row Count 16 (+ 2) Target: cellule tumorali; {\bf{rafforza il SI}} \newline % Row Count 17 (+ 1) Sfrutta: {\bf{Tal}} (che fanno homing nel tumore) =\textgreater{} per tumori metastatici \newline % Row Count 19 (+ 2) Meccanismo: {\bf{aumento proliferazione dei linfociti}}, esposizione ad {\bf{antigeni di superficie tumorali specifici}}. \newline % Row Count 22 (+ 3) Tipologia: {\bf{Attiva}} stimolazione diretta del SI =\textgreater{} {\bf{DNA Vaccination}}: sia risposte {\emph{umorali, sia citotossiche}}. Usa {\bf{Gene Gun}} \newline % Row Count 25 (+ 3) Vettore di scelta: {\bf{Adenovirus}} genoma abbastanza grande in cui può essere facilmente introdotto il gene terapeutico. Quelli di 1° e 2° gen sono usati per far esprimere gli antigeni tumorali o stimolare risposta del SI con {\bf{citochinine}} (stimolano la proliferazione dei linfociti) \newline % Row Count 31 (+ 6) } \tn \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} \vfill \columnbreak \begin{tabularx}{5.377cm}{X} \SetRowColor{DarkBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\bf\textcolor{white}{Terapia genica dei Tumori (cont)}} \tn \SetRowColor{white} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{\{\{fa-caret-right\}\} {\bf{Ignegnerizzare Linfociti T citotossici}} \newline % Row Count 2 (+ 2) I linfociti t hanno un antigene per {\bf{TCR}}, funziona in associazione al {\bf{CD3}} =\textgreater{} attiva la chinasi {\bf{ZAP70}} =\textgreater{} segnale di attivazione della risposta linfocitaria. \newline % Row Count 6 (+ 4) Si crea la molecola artificiale {\bf{Car}} che permette a tutti i linfociti di targettare i tumori. Struttura della Car: \newline % Row Count 9 (+ 3) 1) esterno ha il {\bf{dominio di riconoscimento dell'antigene tumorale}} \newline % Row Count 11 (+ 2) 2) interno il {\bf{sistema di segnalazione ZAP70}} \newline % Row Count 12 (+ 1) Vettore: Virus {\bf{lentivirali/retrovirus che esprimono Car}} per Linfociti T citotossici. \newline % Row Count 14 (+ 2) Risultato: Buono se il tumore esprime molti antigeni specifici!% Row Count 16 (+ 2) } \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \SetRowColor{LightBackground} \mymulticolumn{1}{x{5.377cm}}{{\bf{Eterogeneità tumorale}}: non tutte le cellule tumorali sono uguali. \newline {\bf{Cancer stem cells}}: hanno un alto potenziale proliferativo. \newline {\bf{locked nulcleic acids = LNA}} \newline {\bf{PNA = peptide nucleic acid }} \newline {\bf{Proteine Adenovirus}}: \newline \{\{fa-caret-right\}\} {\bf{E1A}}: effetto pro-proliferativo =\textgreater{} attiva p53 \newline \{\{fa-caret-right\}\} {\bf{E1B}}: blocca p53 =\textgreater{} il virus fa ciclo litico \newline {\bf{TAL = Tumour Associate Lymphocyte}} fanno homing nel tumore \newline {\bf{TCR = T Cell Receptor}} \newline {\bf{Car = chimeric antigen receptor }}} \tn \hhline{>{\arrayrulecolor{DarkBackground}}-} \end{tabularx} \par\addvspace{1.3em} % That's all folks \end{multicols*} \end{document}